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台式低速离心机提取牛血清白蛋白实验

2016/3/8 16:01:05      点击:
一、 实验原理:
带点粒子在电场中移动的现象为电泳。通过电泳技术对蛋白的提取,在醋酸纤维素薄膜分离出血清蛋白中的各种蛋白。
二、 实验步骤:
1、盐析: 取小牛血清0.5毫升+PBS液0.5毫升+饱和硫酸铵2.3毫升,充分混匀,静止20分钟,台式低速离心机2500转/分离心10分钟。
2、透析:取玻璃纸一张,折成袋形,将离心后的上清液倒入袋内,用线扎紧上口(注意要留有空隙),放入装有自来水的小烧杯中透析,要不断振动,每隔2分钟换一次水,共换水15次。
3、电泳:
 1)点样
     取一张膜条,将膜条无光泽面向下,放入培养皿中得巴比妥缓冲液中使膜条侵透,取出,用玻璃纸吸干,以薄膜的无光泽面距一端1.5厘米处做点样线,将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。
2)电泳
     将点样后的膜条置于电泳槽架上,放置时无光泽面向下,点样端置于阴极,平衡5分钟,开电源160伏60分钟,关闭电源后用镊子将膜条取出。
3)染色
   将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染料中,染2分钟取出,立即浸于漂洗液中,分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5分钟,直至背景漂洗干净为止。
4.观察结果
     比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果。
 实验仪器:离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、分光光度计。