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脂肪干细胞用低速离心机培养的方法

2016/5/30 18:00:08      点击:

    吸脂术时用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织20 mL. 在1 h内将其移至离心管内,加入等量PBS缓冲液,充分振荡后低速离心800 r/min×10 min.

    反复冲洗3次后加入等量15 g/L I型胶原酶. 37℃水浴中充分振荡30 min,再加入等量胎牛血清(FBS)中止. 低速离心10 min后弃去上清.

    将下层细胞用PBS悬浮后加入16 mmol/L NH4Cl 37℃水浴中10 min以裂解红细胞. 低速离心10 min后再用PBS冲洗3次.

    最后将细胞用含100 mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中,37℃,50 mL/L CO2培养箱中孵育,48 h后首次换液,弃去悬浮细胞.

    随后每3 d换液,1 wk后传代. 将第3代细胞用于流式细胞仪检测. 浓集细胞到109/L后进行流式细胞仪检测.

    细胞传至第3代时将其以2×107/L的细胞数分别转入各定向培养基中进行培养. 诱导培养2 wk后,对成脂诱导组进行油红O脂肪颗粒染色,

另外:

现在脂肪干细胞缺乏特异的表面标志鉴定,各类文献提到脂肪干细胞表达阳性的标志物有:cd13,cd29,cd59,cd49e,cd73,cd90,HLA-ABC等。但表达阳性不代表具有特异性,所以要从标志物上鉴定脂肪干细胞还是很困难的,应该说不具有很强的说服能力。

按文献所说的步骤来提取脂肪干细胞,形态类似干细胞,并且具有多向分化的能力,这就足以说明提取的细胞是干细胞。你要是想证明你养的就是干细胞,最好的办法笔者认为还是做个多向诱导分化。

仅供大家参考!